来源:《微生物学杂志》2010年第03期 作者:辛晓妮;闫志勇;杨丽;吴瑶;王斌;宋旭霞;罗玮;
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嗜麦芽寡养单胞菌D2株单加氧酶基因的克隆与表达

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构建嗜麦芽寡养单胞菌D2株荧光素样单加氧酶基因表达克隆载体,并进行融合表达。PCR扩增出嗜麦芽寡养单胞菌D2菌株基因组DNA中包含单加氧酶基因约1300bp的核酸片段,将其克隆到T载体pMD-18中进行序列测定,所得序列申请并获得GenBank登记号(GQ122330)。DNA star软件分析发现该基因片段中含有一个996bp的完整开放读码框架(ORF),与GenBank中收录的S.maltophilia R551-3(CP001111/GenomeProject17107)和K279a(AM743169)的MO基因核酸序列同源性分别为90%和89%,氨基酸序列同源性分别为93%和90%。根据该ORF序列设计分别含有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的表达克隆扩增引物,PCR扩增、双酶切后将产物亚克隆到pET32a载体中,经过双酶切验证,证实成功获得了表达重组载体pET32a/MO;将其转化宿主菌E.coli BL21,IPTG诱导后成功表达出54.2ku的MO融合蛋白,为该酶进一步的功能研究和开发奠定了基础。(本文共计4页)       [继续阅读本文]

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微生物学杂志杂志2010年第03期
微生物学杂志
主办:辽宁省微生物学会;中国微生物学会;辽宁省微生物科学研究院
出版:微生物学杂志杂志编辑部
出版周期:双月
出版地:辽宁省朝阳市

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