来源:《现代预防医学》2008年第08期 作者:杨艳;刘衡川;叶运莉;苏红卫;汪川;
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利用正交设计优化脑膜炎奈瑟氏菌Taqman-MGB探针检测反应体系

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PCR是一种微量的多因素参与的酶促反应,对Taq DNA聚合酶、引物、Mg2+、探针、dNTP等因素反应十分敏感。建立PCR方法,实验条件的摸索是一大难题。已有报道应用正交法优化PCR实验条件[1~6]。而Taqman-MGB探针实时荧光PCR方法在普通PCR的基础之上入了探针,则使反应影响因素增多,各因素之间的相互作用更加复杂。用正交法优化实时荧光PCR的实验体系在报道不多,本研究尝试用正交法来优化Taqman-MGB探针实时荧光PCR检测脑膜炎奈瑟氏菌的反应体系。1材料与方法1.1实验菌株标准菌株29021,由中国医学细菌保藏中心获得。1.2试剂与仪器dNTP、MgCl2,10×Buffer,Taq DNA聚合酶购自宝生物(大连)工程有限公司;SLAN荧光定量PCR检测系统为上海宏石医疗科技有限公司产品。1.3方法1.3.1引物的设计和合成依据Genbank收录的流脑奈瑟氏菌的基因,查找porA基因序列,通过BLAST比对,排除突变序列得到保守序列,针对porA基因的保守序列设计引物和探针,由上海基康生物技术有限公司设计合成。探针和引物序列为:MGB-......(本文共计4页)      

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现代预防医学杂志2008年第2008期
现代预防医学
主办:中华预防医学会;四川大学华西公共卫生学院
出版:现代预防医学杂志编辑部
出版周期:半月
出版地:四川省成都市

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